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上海起發大量現貨alstembio VB100說明書

更新時間:2019-11-15      點擊次數:1577

ALSTEM是一家位于灣區的早期生物技術公司,擁有快速擴展的產品和服務組合,為生物制藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發,ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專業知識的科學家創立。

上海起發大量現貨alstembio VB100說明書

ViralBoost Reagent: #VB100

ViralBoost試劑:#VB100

描述

ViralBoost試劑(500X)是一種新型的小分子混合物,可以增強病毒的產生,并且是有效包裝病毒的強大,廣泛適用的試劑。ViralBoost試劑在轉錄水平上穩定地調節病毒RNA的包裝,可將逆轉錄病毒或慢病毒顆粒的產量提高多達10倍。易于使用的協議使ViralBoost試劑非常適合各種規模的病毒包裝。

 

圖1.來自GFP反轉錄病毒轉導的HEK 293T細胞的流式細胞儀數據,GFP反轉錄病毒在不存在ViralBoost試劑的情況下包裝。

病毒促進病毒生產

 

 

圖2. GFP慢病毒轉導的HEK 293T細胞,有和沒有ViralBoost包裝

ViralBoost病毒產量增加

 

 

產品名稱病毒助推器
目錄 #VB100
尺寸1毫升
運輸環境溫度
儲存和穩定性儲存在4℃。按說明存放該產品可穩定12個月。
質量控制使用人類胚胎腎293T細胞在轉染測定中對每批ViralBoost試劑進行了功能測試。
用法用逆轉錄病毒或慢病毒包裝質?;旌衔镛D染人胚胎腎(HEK)293T細胞后6-14小時,用新鮮的DMEM培養基代替培養基,該培養基補充有10%熱滅活的胎牛血清和0.5%青霉素-鏈霉素,并添加將1/500體積的ViralBoost試劑加入一體積的新鮮培養基中,并繼續在37°C的CO2孵育箱中孵育。
限制使用僅供研究使用。不適用于診斷或治療程序。

ViralBoost試劑是一種新型的小分子混合物,可用于高滴度病毒生產,并且是有效包裝病毒的強大,廣泛適用的試劑。它在轉錄水平上穩定地調節病毒RNA的包裝,可以極大地提高逆轉錄病毒或慢病毒顆粒的產量,多可提高10倍。易于使用的協議使ViralBoost試劑非常適合各種規模的病毒包裝。

 

 

使用流程:

一天:轉染前一天,

1.用1x明膠涂板/盤子30分鐘。吸出明膠,并每100 mm平板接種約3-4 X 10 6個 HEK 293T細胞。每個板使用10 ml培養基。

注意:擁有良好的單細胞懸液(胰蛋白酶消化良好)并均勻分布細胞非常重要。

 

第二天:轉染

注意:按照制造商的規程準備轉染。

2.準備兩個試管,然后向每個試管中加入0.5 ml DMEM。在一個試管中加入DNA混合物(包含病毒載體和包裝混合物),并通過輕敲試管將其充分混合。在另一個管中,添加NanoFect(目錄號NF100)。通過互聯管混合。

注意:在室溫(20–25°C)下孵育不超過5分鐘。

3.將NanoFect-DMEM混合物轉移到DNA管中,上下吸移2-3次。渦旋5-10秒,充分混合。

4.在室溫下孵育約15分鐘,以使NanoFect / DNA復合物自組裝。

5.滴加NanoFect / DNA混合物到板中,輕輕搖動板并將板放回培養箱中

 

第三天:更換培養基并添加ViralBoost

6.用10 ml新鮮培養基代替上清液,并補充20 µl ViralBoost(500X)。將板返回細胞培養箱。

 

第四天:收集病毒

!注意小心處理病毒材料,避免溢出。使用漂白劑對危險液體進行消毒(終濃度為10%,持續30分鐘)。

7.將上清液收集在50 ml錐形管中,并置于冰上。離心機中以千克上清液10分鐘,以除去細胞碎片。(將離心機預設為4°C)

8.通過0.45 µm過濾器過濾上清液。將已過濾的上清液轉移至無菌容器中,并每隔4體積的含病毒上清液添加1體積的冷逆轉錄病毒/慢病毒沉淀溶液(4°C,目錄號VC100和VC200)。(例如:5毫升逆轉錄病毒/慢病毒沉淀溶液和20毫升病毒上清液)。

9.充分混合并冷藏過夜。

 

第五天:濃縮病毒

10.將混合物在4°C下以1500g離心30分鐘。離心后,病毒顆??赡茉谌萜鞯撞砍拭咨虬咨恋?。

11.丟棄上清液。通過以1500g離心5分鐘來旋轉殘留溶液。抽吸去除所有液體,注意不要擾亂沉淀中沉淀的病毒顆粒。

12.使用冷的無菌PBS或DMEM在4°C下以原始體積的1/10至1/100重懸病毒沉淀。分裝在低溫小瓶中,并在-80°C下儲存直至準備使用。

注意:可以使用病毒濃縮/純化程序除去ViralBoost試劑。當直接用于轉導HEK 293T細胞時,尚未檢測到帶有ViralBoost試劑的病毒顆粒粗品對目的基因表達的副作用,但不同細胞系之間可能存在差異。建議事先測試ViralBoost對靶細胞的作用。

 

 

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