抗體純化樹脂? -富士膠片和光
KANEKA KanCapA™
本產品為Protein A親和層析樹脂。用于從活體樣本及細胞培養上清.純化免疫球蛋白及包含Fc段的重組抗體。
本產品由高交聯纖維素微珠及新研發的耐堿Protein A配體構成,可用于IgG的親和純化。
◆特點
• 耐堿
• 良好洗脫條件
• 高抗體結合能力
• 可循環使用
• 便于擴增
◆關于改良Protein A
KanCapA™采用的不是天然Protein A,而是使用變異型C域5聚物的新型Protein A。
天然Protein A的C域結合于Fc段,也結合于Fab段,其中與VH3亞家族抗體的反應性較高。該類型的解離需要弱酸條件下洗脫。
為改善該問題,使用分子設計系統重新設計分子,研發了保持耐堿性、改善Fab段的非特異性結合及洗脫曲線的Protein A。
本產品采用的Protein A
1.C5聚體蛋白質 | 良好pH條件下清晰地洗脫抗體 | |
2.較高的耐堿性 | ||
3.減少Fab段的非特異性結合 |
◆產品特性
KANEKA KanCapA™ 產品特性
矩陣 | 高交聯纖維 | ※ 1) 平均粒度為累積體積分布的中間粒度 2) 5%動態結合容量為前端分析測定(停留時間3分鐘) 3) 可在強堿條件下清洗,但請避免長時間的清洗 4) 請勿冷凍 |
平均粒度1) | 65-85μm | |
配體 | Protein A,重組(抗強堿) | |
結合 | 化學結合(還原胺化) | |
動態結合容量2) | ≧35mg 人多克隆IgG/mL載體 | |
化學穩定性3) | 使用親和層析通用可溶性溶媒時較穩定 | |
pH范圍3) | pH 2-13 | |
靜止清洗條件3) | 0.1-0.5 mol/L氫氧化鈉 | |
流量 | 大500cm/h(層高: 20-25cm) | |
停留時間 | ≧3分鐘(建議:4-6分鐘) | |
保存條件4) | 20%乙醇渾濁液,1~10℃ |
◆應用
1、Fab段純化應用
• 利用KANEKA KanCapA™的特點,可從經木瓜蛋白酶處理后的IgG溶液分餾Fc段及Fab段。
2、IgG洗脫曲線(pH3.5 & pH3.0)
• 洗脫范圍已優化,可清晰地分餾提純。
3、通過強堿清洗進行樹脂循環
• 進行300次循環處理后(0.1M氫氧化鈉溶液,15分鐘),IgG的結合容量的減少率仍低于20%,表明其循環性能較高。
使用0.1 M氫氧化鈉溶液進行循環處理后的IgG結合活性曲線數據 | 循環處理后(0.1M氫氧化鈉溶液 15分鐘)的IgG回收率及ProteinA配體的滲濾量的曲線數據 |
4、動態結合容量 曲線數據
• 在4-6分鐘停留時間過程中,DBC較高。
※ 動態結合容量表示純化樣本在流動的狀態下,回收程度的數值。動態結合容量較高的載體的流速較快,可回收大量目標分子,因此可以認為在短時間內有效純化目標分子的優質載體。
KANEKA KanCapA™的Dynamic Binding Capacity (DBC; 動態結合容量) 曲線數據
5、不同大小的樹脂填充裝柱的壓力/流速繪圖數據
填充依賴壓力的計算方法是從整體壓力減去系統壓力。
6、KANEKA KanCapA™于各種大小的柱的填充效果
• KANEKA KanCapA™適用于各種大小的柱。
充填方法 | L. D.(厘米) | 高度(毫米) | 培養皿/米 | 非對稱性 |
流動填充 | 4.4 | 200 | 5710 | 1.14 |
軸向力填充 | 7 | 199 | 6063 | 1.06 |
流動填充 | 10 | 201 | 5276 | 1.18 |
流動填充 | 30 | 200 | 5208 | 1.17 |
軸向力填充 | 45 | 233 | 4712 | 1.09 |
以下是脈沖注入數據:
可溶性溶媒:1(v/v)% 丙酮
注入量:1% 柱容量
流速:60 cm/h
◆產品列表
產品編號 | 產品名稱 | 規格 |
114-01071 | KANEKA KanCapA™ | 2mL (net 1mL) |
110-01073 | 10mL (net 5mL) | |
118-01074 | 50mL (net 25mL) |
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