高分子量基因組 DNA:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離出高分子量的高分子量基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。500 納克純化的 DNA 在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上與 GeneRuler™1kb Plus 階梯(Thermo Scientific)一起電泳;最上面的 DNA 梯帶是 20,000 bp。
來自全血的高純度基因組 DNA,不含 RNase:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒從全血中分離的高純度基因組 DNA。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。通過分光光度法分析洗脫的DNA以確定純度比和DNA濃度。
來自全血的無抑制劑基因組 DNA:分離的基因組 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共純化的抑制劑。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中詳述的,對 100 ng 洗脫的 DNA 進行了抑制 SPUD 擴增子擴增的能力分析。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。
基因組靶標的成功qPCR擴增:對分離的基因組DNA的qPCR分析表明,基因組靶標的成功擴增和檢測。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 ABI TaqMan™ β-肌動蛋白 qPCR 測定法測定標稱 20 ng 洗脫的 DNA(基于 Nanodrop 分析)。標準曲線跨越了 100 – 0.032 ng(27,600 – 8.8 個基因組當量)的人類 DNA。測定效率計算為 102%。
分離的基因組 DNA 的酶促修飾:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。1 µg 純化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分鐘。此后限制性產物在1%瓊脂糖凝膠/TAE上電泳1小時。
從分離的基因組和線粒體 DNA 進行長距離 PCR :使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 試劑盒對從全血中分離的基因組 DNA 進行長距離 PCR。3 x 350 µL 全血/供體通過 Ocean NanoTech 試劑盒進行處理,并以 100 µL 洗脫。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖腦苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 線粒體 NADH-泛醌氧化還原酶鏈 1 (MT-ND1) 片段的引物,通過 PCR 擴增 20 ng 純化 DNA。 PCR 產物在 1% 瓊脂糖凝膠/TAE 上電泳 1 小時。這些高分子量目標的成功 PCR 擴增突出了分離 DNA 的結構完整性和我們的試劑盒分離線粒體 DNA 的能力。
與商業血液穩定劑管的兼容性: 血液基因組 DNA 試劑盒可用于從商業血液穩定劑管中分離不含抑制劑的 gDNA。將捐獻者血液抽取到 3 種市售血液穩定產品中,并在室溫下儲存 4 天。使用標準方案通過 Ocean NanoTech 試劑盒處理來自試管的 350 µL 等分試樣。作為穩定過程的一部分,DNA/RNA Shield™ 管也沒有使用 Ocean NanoTech 裂解緩沖液進行處理,因為 DNA/RNA Shield™ 裂解細胞。如分析生物化學,2006 年 4 月 15 日;351(2):308-10 中詳述的,測定了從每次分離中洗脫的 100 ng DNA 抑制 SPUD 擴增子擴增的能力。觀察到的 Cq 與分離的 DNA 模板相對于 SPUD 陽性對照的均勻性表明分離的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制劑。
性能與其他商用產品的對比: Ocean NanoTech的Blood gDNA試劑盒大大優于其他基于磁珠的血液gDNA分離試劑盒。來自同一供體的血液被吸入 K2-EDTA 管中,并使用試劑盒所需的輸入血量通過每個試劑盒處理。分離的 DNA 以 100 µL 洗脫,并通過 NanoDrop 分析和 Qubit 分析評估純度。計算每個試劑盒的總產量(基于 Qubit 測量)和作為血液輸入量函數的產量。所有值均來自三個生物學重復。
目錄# | 產品 | 單元尺寸 | 單價 |
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B0711-096 | PureBind血液基因組DNA分離試劑盒 | 1微米 | 199.00 美元 |
B0711-384 | PureBind血液基因組DNA分離試劑盒 | 10納米 | $ 677.00 |
產品描述 | PureBind血液基因組DNA分離試劑盒 |
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應用 | 從全血中分離核酸 |
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