上海起發biodynamics DS410說明書
biodynamics提供*的生命科學研究試劑。
DynaCompetent® 細胞 IS 突變安全(舊產品名稱:LowInSeq) |
基因組中 DNA 型轉座因子 (IS) 活性降低的大腸桿菌感受態細胞。您可以確保準備好質粒??捎糜诳寺Υ竽c桿菌造成負擔的大型構建體。 *本產品由 Biopalette Co., Ltd. 的專技術 Target-AID® 開發。
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實際上,當將質粒引入和擴增到大腸桿菌中時,就會出現這樣的問題。 |
本產品以DH5α為原株,在大腸桿菌基因組中ISs之間的IS2、IS5、IS10、ISEc63(相似序列)的轉座酶翻譯區使用Target-AID®終止密碼子。 大腸桿菌感受態細胞* 1 * 1雖然 IS 的活性降低,但不保證 IS 不會轉移。
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減少 IS 插入質粒 |
確認 IS 插入 質粒的頻率降低 用耐氨芐青霉s質粒 (30 kb, pUC Ori) 轉化本產品和大腸桿菌 DH5α 菌株后,進行 24 小時液體培養,最多進行 6 次繼代培養。在上述每次培養過程中純化質粒, 并使用HiSeq進行下一代測序以估計插入IS * 2 * 3, 4的質粒的大致比例。 該產品抑制了 IS 插入 DH5α 菌株的質粒。 * 2 IS:IS1、IS2、IS3、IS4、IS5、IS10、IS30、ISEc5、IS609、ISEc63的總數。 * 3 DH5α菌株在+6次傳代培養時計算為超過100%,這表明兩個或多個IS插入到一個質粒中。 * 4單獨將相同質粒插入DH5α菌株,傳代6次后分離出9個克隆,進行Sanger測序,證實了高IS插入率。
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上述質粒用BamHI消化并進行瓊脂糖凝膠電泳。該質粒中有2個BamHI位點,原本產生2個條帶,但通過重復傳代次數確認了在DH5α株中條帶模式發生了變化。建議將 IS 插入質粒。另一方面,用該產物傳代的質粒抑制了條帶模式的變化。 |
防止 IS 對質粒功能區造成損害的示例 |
DH5α GFP 熒光在 48.6% 的菌落中消失或減弱
IS-突變安全 GFP 熒光沒有消失或衰減(沒有 IS 插入)*5
將該產物和大腸桿菌DH5α菌株用具有在lac啟動子控制下的GFP的質粒(不同于上述“減少的IS插入質粒"圖和遷移圖的質粒)轉化。將得到的菌落液體培養18小時,再傳代6次。繼代培養后,將培養液涂布在LB平板上培養過夜。在獲得的菌落中觀察到GFP的熒光。 結果,在DH5α中出現的48.6%的菌落中,GFP的熒光消失或減弱,但在該產物中,沒有確認其中GFP的熒光消失或減弱的菌落。當從DH5α菌株中GFP熒光消失或減弱的菌落中提取質粒并測序時,所有克隆均在lac啟動子,或DNA型轉座因子IS2或在lac啟動子與GFP基因之間插入IS10L。 另一方面,在該產品和來自熒光DH5α菌落的質粒中,從lac啟動子到GFP的區域被完整地保留。 通過繼代培養,DH5α產生了質粒因插入IS而受損的克隆,但證實該產物抑制了IS對質粒的損傷。
* 5使用本產品,即使是完整的質粒,在 LB 板上觀察到的 GFP 的熒光強度也低于 DH5α 的熒光強度(它具有可見熒光)。在該產品中,在 lac 啟動子控制下的 GFP 的表達水平可能低于 DH5α。然而,質粒被克隆和純化沒有任何問題。
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規格 |
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產品 代碼 | 產品名稱 | 容量 | 價格 * 1 |
DS410 | DynaCompetent® 細胞 IS 突變安全 | 10x100 微升 | 39,000 日元 |
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