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evidentic ?開發基于抗藥物抗體 (ADA) 的檢測方法介紹

更新時間:2022-07-25      點擊次數:4031


evidentic 開發基于抗藥物抗體 (ADA) 的檢測方法介紹


將生物治療藥物施用于患者可能會引發免疫反應,從而導致抗藥物抗體 (ADAs) 的產生。ADA 影響產品的藥代動力學特征、藥效學作用、臨床療效或安全性。

生物制品*改變了制藥行業。但這些藥物,包括單克隆抗體 (mAbs),當給予患者時可能會引發免疫反應,從而導致抗藥物抗體 (ADAs)的發展。隨著生物制品市場的繁榮和新型抗體形式的興起,如雙特異性抗體、抗體片段和抗體偶聯物,免疫原性評估已成為重要標準。

 

決定生物藥物免疫原性的因素可以是:

  • 內在——分子結構、宿主細胞 DNA/蛋白質、配方;

  • 外源性——劑量、途徑、內源性對應物;

  • 宿主相關——遺傳特征、免疫狀態、疾病狀態。

 

了解可能對產品的藥代動力學特征、藥效學作用、臨床療效或安全性產生不利影響的 ADA 的發生率或影響,這在任何治療性蛋白質產品開發計劃中至關重要。因此,生物治療藥物產生的免疫原性引起了監管機構、行業和臨床醫生的極大關注。

 

如何檢測和表征 ADA?

在接受生物藥物治療的患者中發生的 ADA 可分為兩種主要類型:

1. 中和阻斷,直接干擾藥物與其靶點結合的能力;

2. 識別藥物上其他表位但仍允許抗原結合活性的非中和性 ADA。例如,針對藥物 Fc 區的抗體。

血清樣品中中和和非中和 ADA 的測定對于藥物開發的臨床前和臨床階段非常重要。該過程涉及 (1) 篩選測定,(2) 確認測定,和 (3) 表征測定。

 

篩選試驗

這些技術檢測治療性蛋白質中 ADA 的存在。在施用生物治療產品后,篩選測定評估每個患者樣本中和患者樣本之間的多克隆抗體。酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)、放射免疫沉淀試驗 (RIPA) 等方法和電化學發光 (ECL)、珠基試驗、Gyrolab 系統、表面等離子共振 (SPR)、生物層干涉測量等新技術均可用于確定免疫原性的初步篩選試驗。

 

為篩選 ADA 開發的平臺必須考慮:

  • 適合治療的格式和設計;

  • 用于測定靈敏度的陽性對照;

  • 檢測具有所需特異性(IgM、IgG 亞類等)的抗體的能力;

  • 來自治療本身的潛在干擾、來自聯合用藥和/或疾病特異性問題(例如,類風濕因子 (RF)、藥物靶標)的干擾。

 

為檢測生物治療產品而開發的所有篩選試驗都必須在各自的實驗室內進行優化 和驗證,以確保重現性和準確性。 將篩選測定結果解釋為抗體陽性或抗體陰性由“切點"(閾值)策略定義。

從 Evidentic購買經批準的生物藥物等分試樣,作為 ADA 檢測的校準品。

 

驗證性分析

這些測定證實了 ADA 對特定治療性抗體的特異性。這種方法通過在同一測定中向處理和未處理的樣品中添加過量抗原來消除篩選測定中鑒定的假陽性樣品。樣品中 ADA 的存在通過處理樣品與未處理樣品的信號降低來確認。

 

表征分析

一旦確認特定藥物的 ADA 存在,表征 ADA 就很重要。陽性樣品的表征、滴度測定、中和潛力的評估、免疫球蛋白類別和亞類、同種型的闡明等。這些因素有助于更好地了解生物藥物的免疫原性及其臨床影響。在這方面,中和測定對于評估 ADA 中和治療性抗體的生物活性的能力至關重要。基于細胞的生物測定或基于非細胞的競爭性配體結合 (CLB) 測定是可用于檢測中和 ADA 的兩種主要體外方法,必須根據時間消耗、易于實施的方案和適當檢測對藥物療效的影響。

 

抗特型抗體

抗特型抗體 (anti-IDs) 是在抗體藥物的 Fv 區域(也稱為特型)內特異性結合抗原結合位點的 ADA。當前一代獲批的抗體藥物是人源化或*人源化的,其中特型是“外來"序列。因此,抗 ID 通常是響應大多數抗體藥物而產生的最常見的 ADA。

閱讀更多:治療性抗體的出現

 

除此之外,抗 ID 已成為免疫原性和藥代動力學研究的重要體外診斷工具。對于分析開發,在動物模型中產生針對生物藥物的抗 ID,通常是小鼠/兔單克隆或多克隆。根據anti-ID在抗體藥物Fv上的結合位點,anti-ID抗體可以是中和的也可以是非中和的,分為三種類型:

  1. 互補位特異性或抗原阻斷抗-ID:直接與抗體藥物的抗原結合位點結合,直接與靶抗原競爭。這些是中和抗 ID,可用于檢測血清中游離/未結合的藥物分子;

  2. Non-blocking anti-IDs:結合位點不與抗體藥物的互補位重疊,使藥物與靶標結合。這些是非中和的,可以結合并檢測血清中的總藥物,包括游離藥物和結合/部分結合的藥物;

  3. 復合物特異性抗 ID:僅與抗體藥物靶復合物結合。這些是非中和的,可用于檢測血清中的結合藥物。

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使用抗 ID 和多克隆 ADA 的體外測定用于免疫原性研究。然而,抗 ID 更常用于藥代動力學 (PK) 研究。由于 PK 研究著眼于藥物代謝,因此抗 ID 尤其有助于檢測血清、尿液和其他體液中結合或未結合的藥物。

此外,在生物仿制藥開發方面,抗 ID 是免疫原性可比性研究的重要工具。在生物仿制藥開發的早期階段,使用抗 ID 的篩選和功能測定可以幫助確認候選生物仿制藥對原研分子或參考產品的抗原特異性。用于確認生物仿制藥特異性的一些常用檢測方法包括:

  • 橋接試驗——抗 ID 用于捕獲和檢測生物仿制藥;

  • 流式細胞術——藥物靶向特異性抗 ID 用于檢測與其配體結合在細胞上的生物仿制藥;

  • 結合抑制——中和或阻斷抗 ID 用于確認生物仿制藥是否與細胞上的目標配體結合;

  • 直接 ELISA 測試——抗 ID 可用于篩選候選生物仿制藥,因為它不會與不適合 CDR 序列的 mAb 結合。

 

此外,還進行了比較臨床試驗,以評估生物仿制藥和參考產品的免疫原性。這些試驗必須在最敏感的患者群體中進行,并使用相同的臨床方案(例如,給藥途徑、治療計劃、取樣程序、取樣時間點,包括基線/治療前樣品和儲存條件)和抗體測定生成有效的比較數據。所需的免疫原性數據量取決于從參考產品和/或產品類別中獲得的經驗。這種基于證據的數據有助于臨床醫生/醫師消除對將患者轉換為生物仿制藥或多種生物仿制藥的擔憂。

 

用于 ADA 檢測開發的明顯等分試樣

Evidentic 提供分析數量的商業批準的生物制劑和治療性抗體(嵌合、人源化和人類 mAb),可用作開發和制造體外診斷測定的校準物、陽性、陰性或質量控制。

Evidentic 等分試樣是開發抗特型抗體、抗藥物抗體 (ADA) 檢測試驗和其他利用抗人偶聯二抗的體外 診斷試驗的理想選擇。

 

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