CAT#:220117-1.5
常溫運輸、4℃保存
核酸電泳染料(紫外光型)
產品及特點
目前最常見的替代EB的核酸染料SYBR Green I(屬于花氰類染料)雖然毒性比EB低、靈敏度比EB高,但由于其化學穩定性差(怕光、怕水、怕熱),實驗結果的重復性差;此外,SYBR Green I在電泳過程中能在DNA分子間移位,使DNA條帶模糊和扭曲,使得電泳清晰度和分辨率不如EB。所以在實際應用中依然不能有效替代EB。本產品是同時具有EB穩定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料,其特點如下:
1. 低毒。其主要成分未發現對人體有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保護使用者的健康和保護日益惡化的環境。
2. 靈敏。檢測靈敏度跟EB相當,能滿足常規核酸電泳實驗要求。
3. 穩定。對光、水和熱的穩定性跟EB相當,可加入瓊脂糖凝膠中反復熔化。
4. 無分子間位移現象。不會出現SYBR染料常見的條帶模糊和扭曲現象。
5. 使用方法多樣。既可以加入熔化的膠中,也可以電泳后染色,還可用于PAGE。
6. 跟各種常用的核酸電泳緩沖液(如TBE、TAE)兼容,但在TBE中背景低。
7. 觀察時可以使用現成的觀察EB的300nm UV紫外儀。
8. 既可用用于DNA電泳染色,也可用于RNA電泳染色。
DNA或RNA濃度較高時還可以直接在日光下觀察(需要將膠放在黑色背景下)。由于避免了UV對DNA的傷害,尤其適用于膠回收實驗。
規格及成分
成 份 | 編 號 | 規格 | 包裝材料 |
核酸電泳染料(紫外線型) | 220117 | 1.5 mL | 1.5mL棕色管 |
使用手冊 | 220117sc | 1份 | 無 |
運輸及保存:
常溫運輸,4℃保存,有效期一年。
自備試劑:
電泳緩沖液和瓊脂糖凝膠
使用方法:
注意:雖然本產品的主要成分未發現對人體有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作時最好還是戴上塑料手套。
使用方法之一:電泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA一樣)。
本方法是將本產品直接加入溶化的凝膠中使用,只適用于瓊脂糖凝膠電泳,不適用于PAGE。
1. 將本產品直接加入到融化的瓊脂糖凝膠中,每100mL凝膠加5 uL本產品(如果用TBE緩沖液)或電泳染色,混合均勻后倒膠。瓊脂糖凝膠中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否則會相互干擾)。注意:一定要保證瓊脂糖熔化,尤其是在第一次熔化膠的時候,否則未熔化的小顆粒將產生跟染料相同的熒光。
2.將DNA樣品與DNA上樣液按比例混合后上樣。注意:一定要使用不含SDS等去污劑的上樣液,否則SDS會跟染料結合,極大地降低靈敏度。
3. 上樣后電泳,電泳參數同常規的電泳。
4. 電泳結束后在300 nm左右 的UV下觀察。注意:不要使用波長為260 nm或360 nm的UV,否則檢測靈敏度會降低。如果DNA或RNA濃度較高,還可以直接在日光下直接觀察(需要將膠放在黑色背景下),避免UV對DNA的傷害,尤其適用于膠回收實驗。
注:顯色結果:在紫外下,DNA濃度非常高的時候是白色,濃度低的時候是綠色的,單鏈核酸有時是紅色的。
使用方法之二:電泳后染色DNA
本方法是在電泳后對DNA進行染色,適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE。但該方法需要單獨的染色處理,染料用量較大,不推薦用于瓊脂糖凝膠的染色。
1. 按照常規方法進行電泳。
2. 用去離子水將本產品稀釋500倍后(100 mL水需要加0.2 mL 本產品),將凝膠放入,室溫下搖晃染色30分鐘(對瓊脂糖凝膠)或15分鐘(對PAGE)。
3. 用水脫色10-30分鐘,具體時間需根據背景強弱決定,其余同方法一。
注意:電泳后染色液可以反復使用次數。
疑難解答
Q:本產品可否用于RNA染色?
A: 可以,不論RNA是在甲醛變性膠中電泳,還是在普通的TBE或TAE膠中電泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一樣呈綠色,
Q:本產品是否可以加入上樣液中進行染色?
A:不行,本產品只能直接加入凝膠中進行染色或電泳后再染色。
Q:為何前端(靠近正極)的DNA條帶很淡或根本看不見?
A:跟EB一樣,電泳時本產品朝負極方向移動,當前端的DNA(最小片段)進入沒有本產品的區域時,已經結合的染料分子會逐漸從DNA分子上脫落,所以條帶會變淡或根本看不見。解決辦法之一是縮短電泳時間或電泳后再染色;之二是在每100 mL電泳緩沖液中補加3-5uL染料。
Q:本產品在哪種緩沖液中效果好?
A:在 TBE中效果好。如果使用TAE 100mL膠中加3-5 uL本產品就可以。
Q: 為何電泳后前面部分(靠近正極)的膠呈白色,后面的膠呈黑色?
A: 本產品帶正電,電泳時往上走,膠的黑色部分是染料上移后留下的無染料膠。本產品在TAE中背景強,可參考上個問題答案更換電泳液以降低背景值。
Q:用SYBR染色的DNA在電泳時為何容易發生條帶模糊和扭曲現象?
A:SYBR染料一般與DNA的小溝結合,但在常規電泳條件下該結合并不牢固,染料分子可以在標記的和未標記的DNA分子之間轉移,使DNA分子的泳動速度時快(無染料結合時)時慢(有染料結合時),發生條帶模糊和扭曲現象。嵌入型染料(如EB和本產品)與DNA結合牢固,則無此現象。
Q:核酸染料是否都有毒性?
A:核酸染料對動物和人的毒性由多方面決定。一是染料的膜通透性,EB被歸類為強誘變劑是由于其分子量較小,容易進入細胞內。而EB二聚體Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB強上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透過細胞膜,所以毒性反而更低。SYBR系列染料雖然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因為容易水解,不能使用水溶液做溶劑)中,所以如果濺到皮膚表面,更容易進入皮膚。二是染料是否容易被人體降解。比如EB在體外就很難降解,一旦進入體內能在人體內殘留的時間可能比較長,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式與DNA結合)由于不穩定,比較容易自然降解,所以毒性自然較低。三是降解產物是否有毒性,比如用很多方法(如強堿法)降解EB得到的產物有的比EB毒性更大,而有的染料降解產物毒性卻低很多,甚至無毒。四是染料進入細胞核以后是否能跟DNA結合,很多實驗結果顯示即使EB染料也很難嵌入型到染色體中,因為染色體中的DNA已經緊密地與各種組蛋白結合。五是細胞修復突變的能力,正常人體都有很強的修復突變的能力,如修復日光中UV誘導的DNA突變??傊?,一種DNA染料的毒性強弱是多種因素綜合的結果。
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