ELISA試劑盒在實驗室已 經相當普及,絕大多數ELISA試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。用試劑盒當然比自己慢慢摸條件快得多,ELISA試劑盒不僅可以讓實驗更便利, 往往還更加?,F在市面上的ELISA試劑盒既有國產也有進口,數量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出zui適用的產品呢?首先當然得根據我們所要檢測的分子 進行檢測,除此以外也還有一些需要加以考量的因素,本文就來為您介紹一二。
1. 實驗類型
ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個共同特點,就是進行抗原捕獲。一般捕獲形 式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cell ELISA和酶聯免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養的細胞進行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養細胞,然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點。此外,我們還需要根據自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA 實驗。
通常人們使用雙抗夾心法進行ELISA實驗,雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體 之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是*選擇,例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著,又或者抗體只有 一個抗體結合位點。在上述情況下,競爭性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標記的純化抗原與樣本中無標記的抗原進行競爭,以結合捕獲抗體。
2. 抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實際上有時候二者結合效果更好。例如,對于雙抗夾心法而言,用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體(不論多抗還是單抗)的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點,為此我們就需要確 保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發生了沖突,就會對實驗結果產生較大影響。要避免這一問題,我們可以選擇購 買“matched pair”的捕獲/檢測抗體對,這些打包在一起的抗體是商家經過驗證才推薦的好組合。
3. 交叉反應
如果抗體間發生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就 是交叉反應的一個因素。盡管現在購買源自動物的抗體越來越容易,我們仍有必要確認一下是否會產生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測 時,檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應。如果檢測用二抗與捕獲抗體結合,實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的 捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。
與此同時,了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing buffer和blocking buffer),以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分,使檢測結果收到影響。
4. 檢測方式
如今檢測ELISA有許多途徑,我們可以根據自己的偏好進行選擇。一般ELISA檢測的 是酶促反應的可溶性產物,抗體上結合有相應的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應體系中添加有相應的底物(如3,3-二氨基聯苯胺 DAB)。這種酶促反應生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計進行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上,也可以結合在二抗上,還 可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。此外ELISA的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發光或顯色法檢測等。
上述四點展開來講都足以大做文章,因此如果您對考慮購買的ELISA試劑盒還有任何疑問,都可以直接向商家咨詢。各大商家的上也有相應的技術資料提供,您可以從中獲取有價值的產品信息。
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